110Q118｜第110回 薬剤師国家試験 過去問
マクロファージをリポ多糖で刺激して得た培養液を採取し、この培養液中のサ イトカインＸの濃度をサンドイッチELISA（Enzyme︲linked immunosorbent assay） 法で定量することにした。各試料をマイクロプレートに採取し反応を行った後、 450 nm の吸光度を測定した。サイトカインＸの標準物質を用いて標準曲線（検量 線）を作成したところ、下図のようになった。この測定に関する記述として適切な のはどれか。2つ選べ。 標準曲線（検量線） 1 吸光度（測定波長：450 nm） 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 200 400 600 800 1000 1200 サイトカインＸ（pg/mL）
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正解: 1・4
正答
1・4
この問題のポイント
検量線の範囲外は希釈して測り直し、希釈倍率を戻して原濃度を求めます。サンドイッチELISAでは異なるエピトープを認識する2抗体を使います。
解説
図の検量線は吸光度約1までの標準液で作られており、吸光度1.5をそのまま外挿するのは不適切です。試料を測定範囲へ希釈して再測定します。吸光度0.6は検量線上でおよそ600 pg/mLに対応するため、10倍希釈試料なら原液は約6,000 pg/mLです。サンドイッチ法では捕捉抗体と検出抗体が抗原上の別エピトープへ結合します。試料と標準は同一条件で反応させなければ比較できません。
選択肢の確認
1．この培養液の測定値が吸光度1.5 であった場合、培養液を希釈して再測定する ことが必要である。：正答。検量線範囲へ収めます。
2．10 倍希釈した培養液の測定値が吸光度0.6 である場合、もとの培養液中のサイ トカインＸ濃度は約600 pg/mL である。：原液は約6,000 pg/mLです。
3．培養液に含まれる別のサイトカインＹを測定するためには、サイトカインＸの 測定とすべて同じ抗体を利用できる。：抗原特異的な別の抗体が必要です。
4．サンドイッチELISA 法では抗原に対する2 種類の抗体が使われるが、それぞ れの抗体が認識するエピトープは異なる。：正答です。
5．この培養液の測定で発色が検出限界以下だった場合、標準曲線（検量線）の測 定の場合よりも反応時間を長めにしてもよい。：標準と試料の条件を変えてはいけません。
覚えるポイント
範囲外は希釈、原濃度＝希釈試料濃度×倍率。サンドイッチ法は別エピトープを挟みます。