110Q100｜第110回 薬剤師国家試験 過去問
フェノール、パラオキシ安息香酸及びトルエンを含む混合物試料を高速液体ク ロマトグラフィー（HPLC）により分析した。このことに関する記述として正しい のはどれか。2つ選べ。なお、HPLC の分析条件は以下のとおりである。 分析条件 検出器：紫外吸光光度計（測定波長：270 nm） カラム： 内径4.6 mm、長さ15 cm のステンレス管に粒径5 μm の液体クロマ トグラフィー用オクタデシルシリル化シリカゲルを充てんする。 カラム温度：35 ℃付近の一定温度 移動相：pH 7.0 の0.1 mol/L リン酸塩緩衝液／メタノール（3：1 ）混液
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正解: 2・4
正答
2・4
この問題のポイント
ODSカラムと水系移動相を用いる逆相HPLCでは疎水性物質ほど強く保持されます。酸のイオン化状態はpHで変わります。
解説
オクタデシルシリル化シリカゲルは疎水性固定相なので、本条件は逆相クロマトグラフィーです。pH 7ではパラオキシ安息香酸のカルボキシ基は主に解離して親水性が高く、フェノールより早く溶出します。最も疎水性の高いトルエンが最後です。緩衝液pHを下げるとカルボキシ基が非解離形となり疎水性が増して、パラオキシ安息香酸の保持時間が長くなります。逆相でメタノール割合を増やすと移動相の溶出力が強まり、保持は短くなります。
選択肢の確認
1．使用したHPLC は順相クロマトグラフィーである。：ODS固定相なので逆相です。
2．3 つの化合物のうち、最後に溶出するのはトルエンである。：正答。最も疎水性が高く強く保持されます。
3．カラム温度を高くするとピーク高さは大きくなり、ピーク面積は減少する。：温度だけで注入物質量に対応する面積がこのように減るとはいえません。
4．パラオキシ安息香酸の保持時間を長くするには、移動相中の緩衝液のpH を低 くする。：正答。非解離形を増やして疎水性を高めます。
5．トルエンの保持時間を長くするには、移動相中のメタノールの比率を高くす る。：有機溶媒割合を上げると逆相では保持が短くなります。
覚えるポイント
逆相は疎水性ほど遅い。弱酸はpHを下げて非解離形を増やすと保持が長くなります。